Revista nº 811

DESARROLLO DE NUEVOS MÉTODOS DE DETECCIÓN PARA SARS-COV-2 BASADOS EN LA TECNOLOGÍA CRISPR DEVELOPMENT OF NEW DETECTION METHODS FOR SARS-COV-2 BASED ON CRISPR TECHNOLOGY García-Colomer, Balma y López-Jover, Laura Máster en Biología y Tecnología de la Reproducción en Mamíferos. Universidad de Murcia Recibido: 11/06/2020 | Revisado: 23/06/2020 | Aceptado: 11/07/2020 DOI: 10.15568/am.2020.811.cd01 Actual Med. 2020; 105(811): Cartas al editor 244-245 Balma García-Colomer Máster en Biología y Tecnología de la Reproducción en Mamíferos Universidad de Murcia E-mail: balma.garciac@um.es Correspondencia A finales de diciembre del 2019 apareció una nueva neumonía inducida por un coronavirus con un brote inusual en Wuhan (China). La enfermedad es causada por el coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2) y fue nombrada COVID-19 por la OMS el 11 de febrero de 2020, el 11 de marzo de 2020 la OMS consideró que podía ser considerada una pandemia (1). El SARS-CoV-2 es un virus envuelto con un genoma de ARN monocatenario, que inicia la infección por el reconocimiento del receptor ACE2 (enzima convertidora de angiotensina 2) de células humanas (2). El método más frecuente para detectar ácidos nu- cleicos es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), esta es capaz de detectar <100 copias de ácido nucleico por muestra, requiere equipamiento caro y especializado, y si la concentración de áci- dos nucleicos es baja, puede no ser suficientemente sensible (3). Por lo que se han desarrollado otras técnicas basadas en la tecnología CRISPR (Cluste- red Regularly Interspaced Short Palindromic Re- peats) más sensibles y específicas, como son SHER- LOCK, DETECTR o CARMEN. La técnica SHERLOCK (Specific High-sensitivity En- zymatic Reporter unLOCKing) combina la amplifi- cación isotérmica (60-65ºC) de los ácidos nucleicos con la tecnología CRISPR. La endonucleasa utiliza- da es Cas13a que detecta ARN o ADN (utilizando una transcriptasa inversa) específico produciendo un fenómeno denominado “escisión colateral” en el cual se producen cortes aleatorios de secuencia de ARN(3). Tras la amplificación isotérmica se combi- narían los fragmentos con CRISPR/Cas13a y ARNs reporteros, de forma que cuando CRISPR/Cas13a reconociera la secuencia de homología se escindi- rían fragmentos de ARN, entre ellos, algunos de los reporteros, con lo que se emitiría fluorescencia (3). Se ha comprobado su eficiencia en la detección de enfermedades infecciosas (4), pero no hay estudios que corroboren su eficacia para la detección del CoV-Sars-2. La técnica DETECTR se basa en el mismo funda- mento que el de la plataforma SHERLOCK, emplea la endonucleasa Cas12a que a diferencia de la Cas13a reconoce secuencias de ADN(5). Al tratarse de un virus de ARN, la amplificación isotérmica requiere de la realización de una transcripción inversa (RT- LAMP). Aa pesar de que recientemente ha sido pre- sentado el desarrollo y validación inicial de un en- sayo basado en CRISPR-Cas12 para la detección del SARS-CoV-2 a partir de ARN extraído de muestras de pacientes (5). Finalmente, la técnica CARMEN (Combinatorial Arrayed Reactions for Multiplexed Evaluation of Nucleic acid) combina la tecnología de microfluí- dica con los métodos de detección mencionados, resultando en una técnica de diagnóstico escalable a cientos de muestras. El desarrollo de la platafor- ma CARMEN permite la detección de patógenos de forma multiplicada y adaptable a un mayor nú- mero de muestras (6). Utiliza la detección basada en Cas13 con ARN guía específico, las muestras amplificadas y reporteros marcados con fluoro- cromos que sir ven como identificadores ópticos. CARMEN-Cas13 ha demostrado ser eficaz para el SARS-CoV-2 (6). En definitiva, se han desarrollado nuevas técnicas más eficientes y específicas para la detección de áci- dos nucleicos en muestras humanas con la finalidad de detectar de una forma más rápida y sencilla pa- tógenos que puedan causar enfermedades, aun así, se precisa de más evidencias para la verificación de su efectividad en la detección del SARS-CoV-2.