Revista nº 812

Hematoxilina férrica de M. Heidenhain en cortes semifinos | López-Cepero JM, et al. Actual Med. 2021; 106(812): 24- 29 26 lación) de 2176x1632 píxeles. Las imágenes RGB se guardaron como ficheros TIFF (sin compresión) para utilizarlos con el software imageJ (FIJI) (11). Las imá- genes RGB se separaron por canales para obtener la imagen 8-bit del canal verde (G), y presentar los va- lores de pixel en surface-plots que permiten visuali- zar intuitivamente: 1) la distribución de intensidad lumínica (verde) que corresponde a los gránulos de menor tamaño, 2) la superposición de la imagen de difracción de los bordes de objetos adyacentes y 3) la densidad óptica axial de cada gránulo. No abordamos aquí los problemas ni los límites reales de los algo- ritmos de segmentación para objetos cuyo tamaño se encuentra en el límite de resolución. La coloración proporciona una gama de tonos grises que cubren un rango muy amplio de densidad ópti- ca. Se observan todos los elementos de la estructura tisular de la adenohipófisis (12-14). Aparecen colorea- dos los núcleos, con buena definición de la membrana nuclear (por aposición de la cromatina periférica a la lámina nuclear). En el espacio extracelular se han te- ñido de modo difuso las fibras de reticulina y coláge- na que rodean el lecho capilar sinusoide y que forman los pequeños tabiques separando los cordones celula- res. Se tiñen bien numerosos gránulos de secreción de varios tipos celulares (Figura1) Los tipos de gránulos se distinguen por su número, su agrupación espacial, su densidad óptica y su variación dentro de la misma célula. Se pueden utilizar para evaluar el contraste y la resolución del método (Figura2). Los más densos, homogéneos y abundantes corresponden con toda probabilidad a células de prolactina (PRL) en reposo que han proliferado y permanecido en la glándula tras un embarazo. Estas células forman grupos y presentan mucha regularidad citológica. Las células somatotropas (GH), más pequeñas, y que suelen ser la mitad de la po- blación del lóbulo anterior no tienen tanta regularidad. Sus núcleos son semejantes pero la variabilidad del esta- do funcional en esta población, y la variación en tama- ño y número de sus gránulos, nos impide reconocerlas a todas según criterios estrictamente morfológicos. Las siguientes células en abundancia, en hipófisis normales, suelen ser las gonadotropas (FSH, LH) pero también ca- recen de un aspecto homogéneo salvo en la presencia de gránulos diminutos, por debajo de la resolución del m. óptico convencional y que no se visualizan como enti- dades aisladas. Es muy posible que también se tiñan e impartan al citoplasma un aspecto grisáceo difuso. Las células corticotropas (ACTH, MSH, POMC) son poco frecuentes pero muy variables, de gránulos pequeños, y escasos. No es fácil asignarles unos rasgos citológicos regulares ni con esta coloración ni con ninguna otra. De hecho, constituyen gran parte de las células cromófo- bas y. además sufren con frecuencia procesos regresivos (cambio hialino de Crooke). Tampoco es posible asignar un aspecto citológico específico a las células tirotropas, aunque suelen presentar morfología alargada, pero son muy infrecuentes (5%) y con gránulos de aspecto y nú- mero muy variables. Las únicas células que son inequívocamente identifi- cables son las células foliculares (13) por su aspecto nuclear y citoplásmico, su morfología estrellada y su posición central en los cordones endocrinos. También podemos detectar escasas células que parecen ser indi- ferenciadas, de escaso tamaño y sin rasgos citoplásmicos significativos. Figura 1. Hematoxilina Férrica de Heidenhain. Hipófisis humana. Inclusión GMA. Corte semifino 2µm. Objetivo 63x /1,25 oil. Se observa perfectamente la variabilidad citológica de los distintos tipos de células hipofisarias. Es posible agruparlas según estos criterios (morfología nuclear y rasgos citoplásmicos) pero algunas de estas células no se pueden identificar correctamente sólo por sus rasgos morfológicos. Destacan las células mamotropas (de prolactina) abundantes y repletas de gránulos por tratarse de una mujer que ha tenido un embarazo previo. Una de ellas se ha seleccionado para visualizar los gránulos de secreción con software de análisis de imagen (ImageJ). La franja seleccionada en amarillo (2µm de ancho) equivale al grosor del corte. Por eso se puede ver en la imagen de esa zona y en la representación 3D (surfaceplot), que caben dos pisos de gránulos en el espesor del corte. Eso significa que en la microfotografía algunos gránulos se superponen inevitablemente a otros. Se ha seleccionado uno de los gránulos en un rectángulo de 1,43 x 1,43 µm (16 x 16 pixeles). El muestreo de la imagen por el CCD de la cámara no tiene suficiente resolución con este objetivo (63x) pero puede identificarse bien el área sobre el que se reparte la imagen de difracción del gránulo. No es posible medirlos con exactitud, pero es posible contar su número (aproximadamente puesto que algunos se superponen en el espesor del corte) RESULTADOS