Revista nº 812

López-Cepero JM, et al. | Hematoxilina férrica de M. Heidenhain en cortes semifinos Actual Med. 2021; 106(812): 24- 29 27 Sobre el mecanismo de tinción. Una molécula de hematoxilina (sin oxidar y sin mor- diente) es esencialmente un polifenol y se une débil- mente a los tejidos por puentes de hidrógeno (de sus cuatro grupos fenol). Cuando la hematoxilina se oxi- da a hemateína, se pierde un átomo de hidrógeno del carbono que une ambos anillos fenólicos. Los dos or- bitales π interaccionan a través de este carbono insa- turado y se produce el cambio de color de la molécula. Además, uno de los grupos fenol se ioniza y el residuo [–O - ] convierte la molécula de hemateína en un colo- rante aniónico (con carga negativa)(6). El Fe 3+ en solución forma un complejo con seis molé- culas de agua, [Fe (H 2 O) 6 ] 3+. que se hidroliza y reduce su carga positiva [Fe (OH) 2 (H 2 0) 4 ] + .Cuando el catión se une a una molécula de hemateína, también se ioniza el otro grupo fenólico adyacente al enlace iónico y el Figura 2. Hematoxilina Férrica de Heidenhain. Hipófisis humana. Inclusión GMA. Corte semifino 2µm. Objetivo 100x /1,30 oil. Agrupación de células mamotropas, de prolactina (P) en reposo y repletas de gránulos gruesos con áreas citoplásmicas más pálidas que corresponden al aparato de Golgi. La densidad de los granos es variable y su delimitación y medida es difícil puesto que no es posible una segmentación precisa de sus bordes mediante análisis de imagen. Sin embargo, puede asegurarse que todas pertenecen a la misma estirpe y se diferencian claramente de la otras cuatro que son difíciles de identificar de modo fiable. La primera (1) destaca por su pequeño tamaño, ausencia de gránulos visibles, citoplasma gris homogéneo y tres espacios vacíos que pudieran corresponder a inclusiones lipídicas. La segunda (2) presenta el aspecto de una célula indiferenciada. La tercera (3) es otro tipo celular (¿somatotropa?) que está repleta de gránulos muy pequeños y tan cercanos difícil de reconocer visualmente como elementos separados. Tampoco es posible la separación (segmentación) informática de éstos. La cuarta (4) parece corresponder por su núcleo y su citoplasma grande y pálido a las células cromófobas de estirpe corticotropa. En este tejido, la información morfológica no es siempre suficiente para asignar las células a estirpes endocrinas concretas. Sin embargo, la coloración impregna detalles estructurales mínimos (diferentes granos de secreción) aunque algunos no puedan resolverse con un microscopio convencional. Las áreas seleccionadas (derecha) pueden visualizarse mejor mediante una representación tridimensional (surface-plot) e incluso establecer un recuento aproximado de los gránulos presentes en un área de 10 x 10 µm y de 2µm de grosor. Como no es una imagen fluorescente no puede realizarse una reconstrucción del espesor del corte con microscopía de barrido confocal (CLSM). En cambio, se podría visualizar los distintos planos del espesor del corte con microscopía de iluminación estructurada (SIM, Apotome©), mejorar la resolución y realizar la reconstrucción 3D. DISCUSIÓN