Revista nº 812

Hematoxilina férrica de M. Heidenhain en cortes semifinos | López-Cepero JM, et al. Actual Med. 2021; 106(812): 24- 29 28 Fe 3+ quedaría unido a dos átomos de oxígeno que ac- túan como bases de Lewis (donantes de electrones) al hierro. En la práctica, cuando los cortes mordentados con Fe 3+ se introducen en una solución de hematoxi- lina, hay un exceso de colorante, éste se oxida a he- mateína, y cada catión férricose une mediante enlace iónico a dos moléculas de colorante. En ese complejo [2hemateína:1Fe 3+ ] si se ionizan los dos grupos feno- les adyacentes y se ionizan además dos moléculas de agua [OH - ] unidas al catión férrico (7), el conjunto, en teoría, tiene carga negativa y debería actuar como un colorante ácido pero el patrón de tinción no se co- rresponde con los típicos colorantes ácidos. El hierro unido al corte (como mordiente) por tanto, no es el mecanismo de anclaje al tejido y es extraído y secuestrado por la hemateína para formar el complejo [2hemateína:1Fe 3+ ]. Esta laca férrica con la hemateí- na, aparenta ser un colorante básico, que tiñe la cro- matina (basófila por su contenido de DNA), pero re- sulta que también tiñe igualmente los núcleos después de la extracción del DNA (uniéndose las histonas). En realidad, la laca se une al sustrato por su carga global, y por enlaces no covalentes: puentes de hidrógeno (de los grupos fenoles libres) y fuerzas de van der Waals. Hay que tener en cuenta, que tras la oxidación a he- mateína y la formación de la laca férrica cada molécu- la sigue manteniendo dos grupos fenoles libres. Sobre la resolución y contraste de las imágenes. Los gránulos de secreción varían en número, densi- dad y distribución según el tipo de célula. Algunos tipos celulares no tienen gránulos visibles, no porque no se hayan teñido, sino porque suelen estar por de- bajo del límite de resolución. Se ha utilizado el sof- tware ImageJ para calibrar las medidas (en micras) y facilitar la visualización de la imagen de los gránulos (Figura 2) mediante la representación de los valores de gris de los pixeles en forma de surface-plot: Así se pueden contar, pero no medir porque, en esta escala de tamaño (fracciones de micra) el halo de difracción difumina los bordes y no pueden delimitarse ni me- dirse con exactitud. La segmentación algorítmica no es aplicable para aislar objetos que están delimitados por un gradiente (no un borde neto) y cercanos al lí- mite de resolución. Sobre su utilidad morfológica. Resulta evidente que no podemos identificar los tipos celulares endocrinos de la adenohipófisis sobre bases exclusivamente morfológicas. Ni los colorantes, ni sus combinaciones (tetracromo de Herlant) (15, 16) ni las técnicas histoquímicas (17) han proporcionado nunca seguridad para la clasificación de los tipos celulares endocrinos (18-20). Los numerosos estudios de mi- croscopía eléctrónica(21) solo han conseguido cons- tatar la considerable variabilidad dentro de cada tipo celular. Solo la inmunohistoquímica (21,22) permite asignar hormonas específicas, y colocalizar distintos productos dentro de la misma célula, aunque siem- pre hay células en reposo, poco diferenciadas, o en degeneración, que no contienen suficiente hormona. Los marcadores de linaje (23,24)(detectables por in- munohistoquímica) son mucho más fiables, pero no señalan el estado funcional (ciclo secretor) como sí lo hace la detección del contenido hormonal. El mé- todo de la HFe no permite identificar las células en- docrinas según criterios estrictamente morfológicos en microscopía óptica, Sabemos que no es así. Este tejido demuestra, en cambio, que podemos visuali- zar simultáneamente muchos detalles citológicos con hematoxilina férrica y describir la enorme variabi- lidad debida a la existencia de muchos tipos celula- res (y estados funcionales) con un solo método, que proporciona una imagen monocromática, pero con un amplio rango de densidad óptica. Suministra muy buen contraste incluso en cortes de espesor mínimo con una escasa cantidad de material. Esta efectividad colorante solo es comparable (en contraste) al azul de toluidina, pero no en su patrón de tinción. Aunque no conozcamos la razón de su afinidad por unas u otras estructuras, el patrón de tinción de la HFe es reprodu- cible con facilidad, aunque también puede ajustarse para modular el resultado. Es fácilmente fotografia- ble y puede ser estudiado mediante análisis de imagen para medir la cantidad relativa de colorante retenido por distintos orgánulos o sustratos. En resumen: un método que no es específico (como la histoquímica o la inmunohistoquímica), que solo proporciona una intensidad de tinción relativa de unos elementos con respecto a otros, y que produce distintos patrones de tinción según su ejecución, es sin embargo útil para visualizar diferentes tipos celulares en un territorio, o la variabilidad citológica dentro de una población homogénea. Corresponde al observador interpretar esta variabilidad en términos biológicos teniendo en cuenta el conocimiento previo del tejido y la informa- ción arquitectural o cuantitativa (o estereológica) que pueda deducirse mediante análisis de imagen. 1. Heidenhain M. Beiträge zur Kenntnis der Topographie und Histologie der Kloake und ihrer drüsigen Adnexe bei den einheimischen Tritonen. Arch. Mikr. Anat. 1890;35:173–274. 2. Heidenhain M. Neue Untersuchungen über die Centralkörp- er und ihre Beziehungen zum Kern- und Zellenprotoplasma. Arch. Mikr. Anat.1894;43:423–758 . 3. Heidenhain M. Hämatoxylin-Chromsalze. Enzyklopadie der Mikroskopischen Technik, Bd. I. 1910. 4. Langeron M. Précis de microscopie : technique, expérimen- tation, diagnostic. Masson et Cie, Éditeurs. 1949. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS