Revista nº 814

Endotelio corneal derivado de células madre mesenquimales | Martínez-Castillo R, et al. 286 Actual Med. 2021; 106(814): 280- 290 Autores y Año de publicación Método de diferenciación Joyce et al. 2012 Se aislaron MSC de sangre de cordón umbilical tipo 1 y 4 (UCB1-MSC y UCB4- MSC).Cultivo en Lens Epithelial Cell-Conditioned Medium (LECCM). (Medio producido a partir de células epiteliales de cristalino humano cultivadas hasta confluencia en Eagle’s Minimal Essential Medium , 20% FBS y solución antibiótica/antimicótica diluida 1:100 y su posterior centrifugado y filtrado). Se cultivaron en otros dos medios de cultivo, uno basal o MSC Basal Medium (MSCBM) y Basal Medium to culture Lens Epithelial Cell (LECBM). Yamashita et al. 2018 Aislamiento células MSC suplementadas con Alfa-Modified Eagle Medium, 10% FBS, penicilina y anfotericina B (A 37ºCy 5% CO 2 ) (cultivo inicial 3x10 5 células / cm2 semi confluencia en 3-5 días). Formación de esferas de MSC colocando MSC a una densidad de 3x10 6 celulas/ placa en placas de cultivo formadoras de esferas 3D y medio DMEM y F12 medium suplementado con factor de crecimiento epidérmico y Dipéptido L-alanina L-glutamina cultivándolas durante 2-4 días para generar esferas. Posteriormente se disocian las esferas en células en solución de disociacioón con Accutasa y se suspenden en una densidad de 2x10 5 células/cm 2 en platos de 35 mm con reactivo de cultivo de tejidos sin suero que contiene fibronectina, colágeno y albúmina. Se cultivan con el medio inductor de endotelio corneal que está basado en el medio de Eagle Essential Medium suplementado con 0,5 microM de BIO (inhibidor de glicogen kinasa 3β), 10 microM de Y-27632(inhibidor de la ROCK), 1% de insulina, trasnferrina y solución de selenio (ITS-G), Triyodotironina 4nM, hidrocortisona 0,5 microgramos /ml , 50 microgramos/ml de acido ascórbico, 1mM piruvato de sodio, 1mM CaCl2, MEM aminoácidos y MEM Essential Vitamin Mixture, todo incubado durante una semana cambiando el medio de cultivo cada 2 días. Gutermuth et al. 2019 MSC cultivadas en el medio de Dulbecco Modified Eagle, glucosa, glutamina y piruvato, 10% Suero bovino fetal y penicilina/estreptomicina. Aislamiento y expansión de las MSC, a partir de biposias de prepucio. Pelado de la membrana de Descemet de corneas de conejo enucleadas y descelularizada. (usando EDTA con agua osmótica purificada) Las células MSC (250.000) se sembraron en la superficie de la membrana de Descemet se cultivan y a las 24h se cambia el medio con Serum Reduced Cultured Medium. Analizaron la topografia de la Descemet con un sitema óptico 3D de superficie. Mediante tecnología láser elaboran unos moldes/matriz de Polidimetilsiloxane siguiendo la topografía descemética (DLT) Esta superficie creada se hidrofíliza con Oxigen Plasma. MSCs en el pase 4 se siembran a una densidad de 900cel/mm 2 , en condiciones estándar y cambiando el medio cada 24h. Feiertag et al. 2020 Aislamiento de las células mesenquimales de la gelatina y prediferenciación a células progenitoras endoteliales humanas incubándolas en medio de Dulbecco modified Eagle con 0.2 de colagenasa NB4 en condiciones estándar durante 24h. Inhibición de la digestión con DMEM suplementado con 10% de FBS. El pellet celular resultante se suspendió en medio de crecimiento endotelial 2(EGM-2) con 20% de FBS y 1% pen/strep 0,1 % CFA y se cultivó a una densidad de 5.000 células/cm 2 . Se cultivaron en el scaffold de colágeno con DLT. Las células se sembraron en colágeno I con un área de 1 cm 2 y cultivaron a una densidad de 3.000cel/mm 2 . Las primeras 24h se usó EGM-2 enriquecido con FBS 20% y 1% penicilina. Los siguientes días el medio de cultivo se cambió a Human Endotelial Serum-Free Medium suplementado con 20 ng/ml de bFGF, 10ng/ml de EGF y 1% penicilina y se cambió el medio cada 2-3 días. Producción de las membras/matriz de colágeno con la topografía descemética con colágeno tipo I de cola de rata fundido siguiendo la DLT(Usando los resultados de Gutermuth). Tabla 2. Principales métodos de diferenciación de MSC a endotelio corneal humano y principales marcadores celulares utilizados.