Revista nº 818

Descelularización de ovario de rata | Zumaquero Pérez RM, et al. 12 Actual Med.2024;109(818):10- 19 MATERIAL Y MÉTODOS 1. Animales donantes para la generación de bioandamios y pretratamiento del tejido ovárico La ooforectomía se realizó en 7 ratas Lewis hembras de 12 semanas edad y dio como resultado un total de 14 ovarios que se usaron en los análisis con un peso de entre 200-250 g al inicio del estudio. Fueron adquiri- das a JANVIER LABS (Le Genest-Saint- Isle, Francia, número de autorización D53-103-02) y mantenidas en la Unidad Experimental del Instituto de Investigación Biosanitaria, ibs.GRANADA, Granada, España. Los ovarios se aislaron del tejido circundante, se coloca- ron en suero fetal bovino al 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) y se almacenaron a -80ºC grados hasta su uso. 2. Generación de bioandamios ováricos por descelularización Antes del comienzo de los procedimientos de desce- lularización, todos los ovarios se limpiaron correc- tamente de los restos no ováricos que pudo dejar la ooforectomía. Para llevar a cabo los experimentos de descelulari- zación, los ovarios se descongelaron y se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos, tres de ellos con n=3 (P0, protocolo 0; P1, protocolo 1 y P2, protocolo 2) y un cuarto grupo (P3, protocolo 3) con n=2. Cada uno de estos grupos se expuso a uno de los diferentes protocolos de descelularización (Tabla 2), que optan por un procedimiento de descelularización directo mediante la sumersión de los ovarios en el reactivo de descelularización y en continua agitación a tem- peratura ambiente, ya que no se corroboró beneficio alguno en comparación con la perfusión vascular a baja presión a través de la arteria ovárica (22). Ade- más, un quinto grupo de n=3 ovarios se reservó como grupo control, el cual se fijó directamente en formal- dehído al 3.7% (p/v) para posteriormente procesarlo. Tras la búsqueda bibliográfica, se escogió un proto- colo de referencia en la literatura desarrollado por Baker-Alshaikh et al (22) para evaluar el control de la descelularización, al cual llamaremos P0 y que utili- za deoxicolato de sodio (SDC) (Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.) al 2% además de desoxirri- bonucleasas (ADNasas) (Merck/Sigma-Aldrich, EE. UU) . Para el primer protocolo ensayado, P1, se tomó como referencia el protocolo de descelulariza- ción de aloinjertos de nervios periféricos diseñado y publicado por García-García et al (32) al que se le aplicaron unas modificaciones en lo que al tiempo concierne y que utiliza una combinación de tres de- Material Ventajas Desventajas Biomateriales Sintéticos Porosidad, rigidez y degradación controlada Producidos en grandes cantidades y estandarizados Inmunosupresores Estructura final deseada Posible toxicidad Baja biocompatibilidad Naturales Componentes similares a la matriz extracelular (MEC) original Inmunosupresores Contaminación patógena Mala mimetización en la estructura natural Tejidos acelulares (descelularizados) No hay riesgo de rechazo inmunológico, no hay necesidad de inmunosupresores Conservan arquitectura original, señales bioquímicas y biomoléculas bioactivas del tejido Puede ser almacenado a largo plazo Alteraciones estructurales de la MEC Residuos celulares no eliminados Aún no hay resultados prometedores Tabla 1 . Ventajas y desventajas de la utilización de biomaterials sintéticos y naturales vs tejidos acelulares en la fabricación de bioandamios. Fuente: Elaboración propia