Revista nº 818

Zumaquero Pérez RM, et al. | Descelularización de ovario de rata 13 Actual Med.2024;109(818):10- 19 Protocolo 0 Protocolo 1 Protocolo 2 Protocolo 3 Número de ovarios n=3 n=3 n=3 n=2 Ciclos de congelación- descongelación 1 1 1 2 Incubación en dH 2 O - ON ON Detergente 1 2% SDC (16 h) 0,1% SDS (16 h) 0,2 % SDS (24h) Lavados d 2 H0 (24h) 3 con dH 2 O (30 min por lavado; 4°C) 3 con dH 2 O (30 min por lavado; 4°C) Detergente 2 - 0.6% Tritón-X- 100 (23h) 1% Tritón-X-100 (24h) Lavados - 3 con dH 2 O (30 min por lavado; 4%C) 3 con dH2O (30 min por lavado; 4%C) Detergente 3 - 1% SDC (23 h) 1% SDC (24 h) Lavados - 3 con dH2O (30 min por lavado; 4%C) 3 con dH2O (30 min por lavado; 4%C) Pre-tratamiento PBS (1 h; 37°C) PBS (15 min; 37°C) PBS (15 min; 37°C) Enzimas PBS +40 U/mL ADNasa (30 min; 37°C) PBS + 100 mg/L ADNasa + 20 mg/L ARNasa (45 min; 37°C) PBS + 100 mg/L ADNasa + 20 mg/L ARNasa (45 min; 37°C) Lavados 6 con PBS (5 min por lavado: 4°C) 5 con PBS (15 min por lavado: 4°C) 5 con PBS (15 min por lavado: 4°C) Lavados PBS (24 h: 4°C) - - Tiempo total 66 h 69h 78 h45 min 78 h 45 min Tabla 2 . Resumen comparativo de los cuatro protocolos finales de descelularización. Abreviaciones: SDS dodecil sulfato de sodio (Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.), SDC deoxicolato de sodio (Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.), Tritón-X-100 2-[4-(2,4,4-trimethilpentan-2-il)fenoxi]etanol (Merck/Sigma-Aldrich, EE. UU.), ADNasa desoxirribonucleasa (Merck/Sigma- Aldrich, EE. UU.), ARNasa ribonucleasa (Merck/Sigma-Aldrich, EE. UU.), dH2O agua destilada, ON durante la noche, PBS solución salina con fosfato, h horas, min minutos. (Merck/Sigma-Aldrich). Fuente: Elaboración propia