Revista nº 818

Descelularización de ovario de rata | Zumaquero Pérez RM, et al. 16 Actual Med.2024;109(818):10- 19 de señal para todos los protocolos aplicados (P0 = 91.13 ± 5.06 %, P1 = 87.93 ± 6.40 %, P2 = 81.60 ± 2.08 % y P3 = 41.17 ± 4.42 %) siendo significativa en el P3 ya que se reduce cuantiosamente el contenido de GAGs a menos de la mitad respecto al grupo control. En contraposición; P0, P1, y P2 han sido capaces de conservar mejor los GAGs, teniendo estos dos últi- mos protocolos un contenido muy similar entre sí y siendo el P0 el que ha tenido mayor éxito de los tres tratamientos (Figura 3. A). Por otra parte; en cuanto al contenido en colágeno, medido con la tinción MT (Figura 2. C, G, K, O, S), se mostró preservado para todos los bioandamios ováricos en paralelismo con el control nativo, aunque la cantidad se ve reducida conforme la MEC pierde integridad por los protoco- los más agresivos (Figura 3. B). Cantidades poten- cialmente más altas de colágeno preservado fueron vistas en los ovarios tratados con P0 (93.77 ± 8.12 %) y P1 (79.40 ± 5.51 %) en contraste con los otros dos protocolos que contenían SDS y Tritón-X-100 a una mayor concentración (P2 (62.00 ± 11.21 %) y P3 (62.00 ± 11.21). Por último, la tinción VVG (Figura 2. D, H, M, P, T) ha sido utilizada para visualizar las fibras elásticas, aunque también es capaz de teñir colágeno. Esta tin- ción sugirió una disminución casi completa del con- tenido de fibras elásticas en el P3 (2.73 ±0.75 %) en contraposición con el control nativo de ovario (Fi- gura 3. C). Sin embargo, los tratamientos P0 (86.80 ± 7.10 %), P1 (74.53 ± 5.32 %) y P2 (69.33 ± 4.00 %) fueron capaces de mantener fibras elásticas visibles, aunque en menor medida respecto al control. DISCUSIÓN Actualmente, la descelularización exitosa de tejido ovárico y la subsiguiente recuperación de su funcio- nalidad sigue siendo un desafío. Como consecuencia, son numerosos los estudios publicados hasta la fecha sobre generación de ovarios bioartificiales con el ob- jetivo de generar un protocolo de biofabricación es- tándar. Sin embargo, debido a la complejidad estruc- tural y molecular de estos órganos, aún sigue siendo un objetivo por cumplir. Los estudios publicados has- ta la fecha se enfrentan a dos aspectos importantes a la hora de fabricar ovarios bioartificiales: lograr una eliminación celular eficiente y una conservación ade- cuada de la composición de la MEC resultante (GAGs, colágeno y fibras elásticas) (33-35). Es por ello que la gran mayoría de los autores han optado por la com- binación de diferentes agentes descelularizantes (18- 22), donde la concentración y el tiempo de exposición de estos agentes cobran una gran importancia ya que deben de ajustarse a la histología del tejido (36, 37). De acuerdo con esta hipótesis, en este artículo se pre- sentan datos novedosos sobre la descelularización de ovario completo de rata comparando cuatro estrategias diferentes. Para llegar a este fin se han evaluado dis- tintas metodologías combinadas de descelularización: ciclos de congelación-descongelación en los tres pro- tocolos nuevos (P1, P2 y P3) junto con concentracio- nes diferentes de detergentes no iónicos (Tritón-X100) e iónicos (SDS y/o SDC) combinados entre sí con el objetivo de conseguir la lisis de la membrana celular y Figura 3 . Proporción de componentes remanentes de la MEC tras la aplicación de los protocolos de desce- lularización. Histoquímica en AB para GAGs (a), MT para colágeno (b), y VVG para fibras elásticas (c). (*, ** P<0.05) Abreviaciones: CTRL control, P0 protocolo 0, P1 protocolo 1, P2 proto- colo 2, P3 protocolo 3, MT tricrómico de Masson, AB azul alcián y VVG Verhoeff van Gieson. Cuantificación mediante el software Ima- geJ Fiji versión 1.53f51 (Na- tional Institutes of Health, EE. UU.). Gráficas y análi- sis estadísticos mediante el software Prism 9 (Gra- phPad, CA, EE. UU.). Fuente: Elaboración Propia