Original

Basics of isolation and cultivation of chondrocytes according to good laboratory practice

Principios en el aislamiento y cultivo de condrocitos de acuerdo a buenas prácticas de laboratorio

José Manuel Muñoz Olmedo1, Denisa Harvanová1, Tímea Špaková1, Ján Rosocha1, Marek Lacko2, Darina Bačenková1, Judita Amrichová1

1 Associated Tissue Bank of Faculty of Medicine of P. J. Šafárik University and L. Pasteur University Hospital, 041 66 Košice, Slovakia
2 Department of Orthopaedics and Traumatology of Locomotory Apparatus, Faculty of Medicine of P. J. Šafárik University and L. Pasteur University Hospital, 041 66 Košice, Slovakia

Actual. Med. 2014; 99: (792): 65-69 DOI: 10.15568/am.2014.792.or02

Enviado 07-06-2014
Revisado 08-08-2014
Aceptado 20-08-2014

RESUMEN

Objetivos: El objetivo del presente estudio era determinar si los condrocitos aislados de cinco pacientes ancianos (edad media 63 años) con artrosis (grado 3) mantienen su proliferación y potencial condrogénico. El aislamiento y cultivo de condrocitos fueron llevados a cabo de acuerdo a los estándares de buenas prácticas de laboratorio.
Métodos: Los condrocitos fueron aislados de una biopsia de cartílago mediante digestión enzimática. El cultivo fue llevado a cabo en un ambiente controlado (sala blanca). La caracterización del fenotipo de los condrocitos se logró mediante análisis de citometría de flujo.
Resultados: Tras tres semanas de cultivo se podían observar estructuras poligonales propias de los condrocitos, pero también se observaba morfología de tipo fibroblasto en el cultivo. El análisis de la citometría de flujo reveló que el fenotipo de los condrocitos cultivados tras el primer pasaje era positivo para CD44 (98,92%), CD90 (97,11%) y negativo para el marcador hematopoyético CD45 (0,10%).
Conclusiones: Los condrocitos articulares humanos obtenidos de cinco pacientes ancianos con artrosis mantenían un fenotipo condrocitario y podrían ser potencialmente utilizados para la implantación autóloga. Las condiciones para el cultivo fueron establecidas de acuerdo a los estándares de buenas prácticas de laboratorio para así minimizar el riesgo de contaminación celular in vitro.

Palabras clave: Implantación autóloga, cartílago, sala blanca, condrocitos

ABSTRACT

Objectives: The objective of the present study was to determine if chondrocytes isolated from human cartilage of five elderly patients (middle age 63) with osteoarthritis (stage 3) maintain their proliferation and chondrogenic potential. Isolation and cultivation of chondrocytes was performed according to good laboratory practice (GLP) standards.
Methods: Chondrocytes were isolated from cartilage biopsy by enzymatic digestion. Cultivation of cells was performed in a controlled environment (cleanroom). Phenotype characterization of chondrocytes was achieved by flow cytometry analysis.
Results: Three weeks after cultivation polygonal structures typical for chondrocytes were observed, but spindle/fibroblast like morphology was also detected in culture. Flow cytometric analysis showed that chondrocytes were positive for CD44 (98,35% ± 0,50), CD90 (97,15% ± 0,13) after first passage (P1) and the cells were negative for hematopoietic marker CD45 (0,21% ± 0,11).
Conclusions: Human articular chondrocytes obtained from five elderly patients with osteoarthritis maintained a chondrocyte phenotype and could be potentially used for autologous implantation. We have standardized the conditions for cultivation according to GLP standards to minimize the risk of in vitro cell contamination.

Keywords: Autologous implantation, cartilage, cleanroom, chondrocytes

Leer Artículo Completo

Actualmente no se encuentra disponible el contenido del artículo en formato web. Puede leer el artículo completo en PDF a través del botón “Descargar PDF”.

Próximamente podrá ser leído en este formato. Disculpe las molestas.