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Raquel Camacho-Luque
Espectrometría de masas para identificación de micobacterias
Para validar el procedimiento, en el primer pocillo de nues-
tra tarjeta metálica donde se iniciará la lectura de nuestro estu-
dio, se añade 1 µl de control bacteriano standard (Escherichia coli
DH5 extracto de proteína α, Bruker Daltonic ref. 255343) que es
utilizado como control positivo. Se deja secar. Se añade 1 µl de
matriz y se procede del mismo modo a las lecturas de las muestras
de nuestro estudio. Para validar este análisis la identificación del
control positivo tiene que ser E. coli con una puntuación ≥2.000.
RESULTADOS
De los 50 aislados de
Mycobacterium tuberculosis
complex
(MTC), 43 fueron identificados por MALDI-TOF MS como MTC
obteniendo un score >2,0; 5 con un score 1.8-2.0 y 2 no fueron
identificados por no detectarse picos por el sistema. Dentro de las
micobacterias atípicas: 8 cepas
Mycobacterium avium
fueron
identificadas por el espectrómetro de masas con un score supe-
rior a 2,0 y el resto con score 1.6-1.9; todos los aislados de
Myco-
bacterium fortuitum
fueron identificados con un score >2.0; de 4
cepas de
Mycobacterium kansasii
, 3 fueron identificas correcta-
mente con score 1.8-2.0 y 1 fue identificada como
Mycobacte-
rium lentiflavum
con score de 1.6, siendo catalogada como error
de identificación por parte de MALDITOF MS. De las 3 cepas de
Mycobacterium chelonae
, 2 fueron identificadas correctamente
con un score de 1.7-2.0 y otra no fue identificada. Todas las cepas
de
Mycobacterium gordonae
fueron identificadas correctamente
con score 1.7-2.1, al igual que el caso de
Mycobacterium mari-
num
. La concordancia global de resultados entre la identificación
realizada mediante PCR y la tecnología MALDI-TOF fue del 97%,
con un coeficiente kappa de correlación de 0.929 (correlación ex-
celente entre 0.081-1.0). De forma aislada, tanto el diagnóstico
de micobacterias atípicas como de MTC presentaron un índice
kappa de correlación en rango excelente, de 0.951 y 0.958 res-
pectivamente.
DISCUSIÓN
La identificación de nuestros aislamientos de micobacte-
rias patógenas mediante espectrometría de masas MALDI-TOF
demuestra muy buena correlación de resultados respecto a las
técnicas moleculares “gold standard” en el diagnóstico de mico-
bacterias. Esto sumado a la rapidez y sencillez en la obtención
de resultados, que se obtuvieron rápidamente: el tiempo de res-
puesta de preparación de la muestra a los resultados fue de apro-
ximadamente 50 min, una mejora significativa cuando se consi-
dera el tiempo necesario para la identificación de micobacterias
mediante pruebas fenotípicas, sondas de genes, o secuenciación.
Queremos señalar que el inóculo utilizado para la identificación
de micobacterias debe ser mínimo de 105 CFU/mL para obtener
un buen espectro y la base de datos del software debe ser ac-
tualizada ya que es bien sabido que la cantidad de proteínas que
se analizan no es la única limitación en el momento de llegar a
una identificación adecuada; ésta también depende de la existen-
cia en la base de datos utilizada de un determinado espectro de
proteínas que sean coincidentes con las de la muestra. Nuestro
trabajo describe un protocolo de extracción de proteína que es
útil para todos los tipos de micobacterias, ya que presentan una
envoltura resistente y por tanto difícil de degradar y obtener el
perfil proteómico.
Nuestros resultados indican que es bastante factible incor-
porar MALDI-TOF MS para la identificación rutinaria de mico-
bacterias en el flujo de trabajo del laboratorio de microbiología
clínica. Con algunas excepciones señaladas anteriormente, las
identificaciones eran exactas a nivel de género y de especie con
un score menor al que propone el fabricante (Bruker Daltonics)
para la identificación segura a nivel de género y a nivel de especie.
En resumen, creemos que el uso de MALDI-TOF MS podría
considerarse como otra opción válida para la identificación ru-
tinaria de colonias aisladas de especies de Mycobacterium con
puntos de corte menos restrictivos que los del fabricante.
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