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ORIGINAL
Actualidad
Médica
A C T U A L I D A D
M É D I C A
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Basics of isolation and cultivation of
chondrocytes according to good laboratory
practice
Resumen
Objetivos:
El objetivo del presente estudio era determinar si los condrocitos aislados de cinco pacientes an-
cianos (edad media 63 años) con artrosis (grado 3) mantienen su proliferación y potencial condrogénico. El
aislamiento y cultivo de condrocitos fueron llevados a cabo de acuerdo a los estándares de buenas prácticas
de laboratorio.
Métodos:
Los condrocitos fueron aislados de una biopsia de cartílago mediante digestión enzimática. El
cultivo fue llevado a cabo en un ambiente controlado (sala blanca). La caracterización del fenotipo de los
condrocitos se logró mediante análisis de citometría de flujo.
Resultados:
Tras tres semanas de cultivo se podían observar estructuras poligonales propias de los condro-
citos, pero también se observaba morfología de tipo fibroblasto en el cultivo. El análisis de la citometría
de flujo reveló que el fenotipo de los condrocitos cultivados tras el primer pasaje era positivo para CD44
(98,92%), CD90 (97,11%) y negativo para el marcador hematopoyético CD45 (0,10%).
Conclusiones:
Los condrocitos articulares humanos obtenidos de cinco pacientes ancianos con artrosis man-
tenían un fenotipo condrocitario y podrían ser potencialmente utilizados para la implantación autóloga. Las
condiciones para el cultivo fueron establecidas de acuerdo a los estándares de buenas prácticas de labora-
torio para así minimizar el riesgo de contaminación celular
in vitro
.
Abstract
Objectives:
The objective of the present study was to determine if chondrocytes isolated from human car-
tilage of five elderly patients (middle age 63) with osteoarthritis (stage 3) maintain their proliferation and
chondrogenic potential. Isolation and cultivation of chondrocytes was performed according to good labora-
tory practice (GLP) standards.
Methods:
Chondrocytes were isolated from cartilage biopsy by enzymatic digestion. Cultivation of cells
was performed in a controlled environment (cleanroom). Phenotype characterization of chondrocytes was
achieved by flow cytometry analysis.
Results:
Three weeks after cultivation polygonal structures typical for chondrocytes were observed, but
spindle/fibroblast like morphology was also detected in culture. Flow cytometric analysis showed that chon-
drocytes were positive for CD44 (98,35% ± 0,50), CD90 (97,15% ± 0,13) after first passage (P1) and the cells
were negative for hematopoietic marker CD45 (0,21% ± 0,11).
Conclusions:
Human articular chondrocytes obtained from five elderly patients with osteoarthritis main-
tained a chondrocyte phenotype and could be potentially used for autologous implantation. We have stan-
dardized the conditions for cultivation according to GLP standards to minimize the risk of
in vitro
cell con-
tamination.
José Manuel Muñoz Olmedo
1
, Denisa Harvanová
1
, Tímea Špaková
1
, Ján Rosocha
1
, Marek Lacko
2
,
Darina Bačenková
1
, Judita Amrichová
1
1
Associated Tissue Bank of Faculty of Medicine of P. J. Šafárik University and L. Pasteur University Hospital, 041
66 Košice, Slovakia
2
Department of Orthopaedics and Traumatology of Locomotory Apparatus, Faculty of Medicine of P. J. Šafárik
University and L. Pasteur University Hospital, 041 66 Košice, Slovakia
Enviado 07-06-2014
Revisado 08-08-2014
Aceptado 20-08-2014
Palabras clave: Implantación
autóloga, cartílago, sala blanca,
condrocitos
Keywords: Autologous implan-
tation, cartilage, cleanroom,
chondrocytes
Principios en el aislamiento y cultivo de condrocitos de acuerdo
a buenas prácticas de laboratorio
Actual. Med.
2014; 99: (792): 65-69
DOI: 10.15568/am.2014.792.or02
José Manuel Muñoz Olmedo
Associated Tissue Bank of Faculty of Medicine
of P. J. Šafárik University and L. Pasteur University Hospital
041 66 Košice, Slovakia
joseolm91@gmail.com