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Ana Fernández González
Optimización del cultivo de queratinocitos para el desarrollo de un modelo de piel artificial humana
PROCESAMIENTO INICIAL F0
PASE CELULAR F1
RECUPERACIÓN FINAL (RF)
Densidad
de siembra
F0
Dosis de
irradiación
F0
Queratinocitos
F0
Densidad de
siembra F1
Dosis de
irradiación F1
Queratinocitos
F1
Tasa de
Duplicación
Celular F1
Queratinocitos
RF
Tasa de
Duplicación
Celular RF
Tasa de
Duplicación
Celular
Acumulada
Fibroblastos
3T3 (Sigma)
n=3
80.000
cél./cm
2
50 Gy
3.601.092
80.000 cél./
cm
2
50 Gy
6.252.833
0,84
85.190.833
3,76
4,60
Fibroblastos
3T3 (ATCC)
n=3
40.000
cél./cm
2
50 Gy
3.382.388
10.000 cél./
cm
2
50 Gy
12.883.750
1,88
101.136.417
3,05
4,93
Fibroblastos
dérmicos
humanos
(FH)
n=3
10.000
cél./cm
2
50 Gy
3.892.889
10.000 cél./
cm
2
50 Gy
9.025.370
1,07
84.626.291
2,97
4,05
Tabla 7. Tasa de duplicación celular de queratinocitos en el pase celular, la recuperación final y acumulada en función del tipo de feeder.
Tabla 8. Tasa de duplicación celular de queratinocitos en el pase celular, la recuperación final y acumulada utilizando células mesenquimales
troncales derivadas de tejido adiposo como feeder.
PROCESAMIENTO INICIAL F0
PASE CELULAR F1
RECUPERACIÓN FINAL (RF)
Densidad
de siembra
F0
Dosis de
irradiación
F0
Queratinocitos
F0
Densidad de
siembra F1
Dosis de
irradiación
F1
Queratinocitos
F1
Tasa de
Duplicación
Celular F1
Queratinocitos
RF
Tasa de
Duplicación
Celular RF
Tasa de
Duplicación
Celular
Acumulada
Células
mesenquimales
troncales
derivadas de
tejido adiposo
(ADMSC)
n=1
10.000
cél./cm
2
100 Gy
6.123.000
10.000 cél./
cm
2
100 Gy
17.878.500
1,55
10.582.500
-0,76
0,79
Células
mesenquimales
troncales
derivadas de
tejido adiposo
(ADMSC)
n=1
10.000
cél./cm
2
50 Gy
11.520.000
10.000 cél./
cm
2
50 Gy
-
-
330.000
-
-5,13
Los valores de la tasa de duplicación celular de queratinocitos
obtenidos al utilizar las células mesenquimales troncales derivadas
de tejido adiposo como capa alimentadora se reflejan en la Tabla 8.
La tasa de duplicación celular de queratinocitos en el pase ce-
lular y en la recuperación final solo pudo ser determinada cuando la
dosis de irradiación de las células mesenquimales troncales derivadas
de tejido adiposo fue 100 Gy. La tasa de expansión celular acumulada
fue negativa cuando la dosis de irradiación fue 50 Gy (Figura 8).
DISCUSIÓN:
La optimización del cultivo de queratinocitos representa
uno de los retos actuales en investigación, debido a su importan-
cia como componente fundamental de la epidermis para el desa-
rrollo de un modelo de piel artificial humana mediante ingeniería
tisular
(13)(16)(17)(18).
En 1975, Rheinwald y Green (15) establecieron las condi-
ciones óptimas para promover el cultivo de queratinocitos medi-
ante el uso de un
feeder
que favorezca la adhesión y estimule la
proliferación celular. Este
feeder
estaba formado por fibroblastos
3T3 de ratón previamente irradiados (3T3
i
) para inhibir su pro-
pia multiplicación y actuar como capa alimentadora eficaz de
queratinocitos.
El avance de la medicina regenerativa ha hecho posible el
trasplante de piel artificial en humanos, fundamentalmente en
pacientes con quemaduras de gran extensión. Las láminas de piel
trasplantadas deben contener un gran número de queratinocitos
en la superficie garantizando un mínimo porcentaje de trazas de
fibroblastos 3T3i, para evitar células de origen animal en el sus-
titutivo tisular.
La optimización en el proceso de expansión celular de los
queratinocitos, ha llevado a muchos grupos de investigación a estu-
diar un
feeder
alternativo
(19)(20)
, formado por células autólogas
con el fin de evitar el rechazo por parte del paciente. En nuestro
modelo de piel artificial humana, el tiempo limitado en cultivo,
hace imposible el uso de un
feeder
autólogo. En la mayoría de los
casos se han utilizado fibroblastos dérmicos humanos irradiados
Figura 8. Tasa de duplicación celular en el pase celular, en la
recuperación final y acumulada de queratinocitos en función
de la dosis de irradiación de la capa alimentadora de células
mesenquimales troncales derivadas de tejido adiposo.