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Ana Fernández González
Optimización del cultivo de queratinocitos para el desarrollo de un modelo de piel artificial humana
(FH
i
) con resultados equiparables a los obtenidos con fibroblastos
3T3
i
murinos (21)(22)(23)(24)(25).
Los resultados de nuestro estudio también confirman que el
uso de un
feeder
de origen humano permite la expansión celular
de queratinocitos. La utilización de FH
i
aislados de tejido dérmico,
ha facilitado la adhesión y la proliferación de los queratinocitos,
obteniéndose una tasa de expansión de queratinocitos equipara-
ble a la obtenida con la capa alimentadora 3T3
i
. En 21 días, se ha
conseguido obtener un elevado número de queratinocitos, con la
dificultad que supone optimizar el cultivo de este tipo celular en
un corto periodo de tiempo.
Por otra parte, hemos considerado la opción de utilizar cé-
lulas mesenquimales troncales derivadas de tejido adiposo (AD-
MSC
i
) como
feeder
, fuente celular poco explorada y con buenas
expectativas como alternativa a la utilización de FH
i
, al proceder
también de tejido humano y minimizar las posibles complicacio-
nes post-implante. Numerosos grupos de investigación han uti-
lizado células madre de medula ósea con esta finalidad (26), sin
haberse establecido hasta el momento resultados concluyentes.
La limitación en la obtención de muestras, ha comprometido el
desarrollo de nuestro estudio, habiéndose realizado solo una
prueba para cada dosis de irradiación. Por lo tanto, se plantea la
necesidad de realizar nuevos estudios con el fin de optimizar el
procedimiento, debido a que los resultados obtenidos en nuestro
estudio, no permiten establecer conclusiones.
En este estudio, se ha podido determinar el patrón proliferativo
de los queratinocitos en cultivo utilizando tres fuentes celulares
como capa alimentadora: fibroblastos murinos 3T3, fibroblastos
dérmicos humanos y células mesenquimales troncales derivadas de
tejido adiposo. La capa alimentadora es fundamental en este proceso
porque las células que componen esta capa sirven como fuente de
adhesión, y proporcionan factores de crecimiento. Se ha demostrado
que con los fibroblastos dérmicos humanos subletalmente
irradiados como capa alimentadora, los queratinocitos presentan
una tasa de duplicación equiparable a la obtenida con el
feeder
3T3i.
Estos resultados indican que los fibroblastos dérmicos humanos
representan un sistema de capa alimentadora adecuada para
soportar el cultivo de queratinocitos humanos primarios (27)(28).
El estudio llevado a cabo presenta una serie de limitaciones
como son el número de repeticiones realizadas para cada tipo
celular (n=3) que es el “n” mínimo para considerar un estudio
representativo. Además, ha sido necesario adaptar la densidad de
siembra en función del tipo celular utilizado como
feeder
; incluso
de los fibroblastos 3T3 murinos procedentes de casas comerciales
diferentes. En este sentido, para el desarrollo de nuestro modelo
de piel artificial humana, resulta interesante utilizar una menor
densidad de siembra garantizando una menor presencia de
feeder
en los queratinocitos que se incorporen como capa epitelial en el
sustitutivo tisular. Por último, se plantea la posibilidad de realizar
la determinación de la viabilidad celular mediante técnicas más
avanzadas en estudios posteriores.
Con todo esto, a pesar de tener un número bajo de repeti-
ciones, actualmente podemos considerar los fibroblastos dérmi-
cos humanos como
feeder
alternativo a los fibroblastos 3T3 muri-
nos. Utilizando una menor densidad de siembra, se han obtenido
resultados similares en cuanto a número de queratinocitos, por-
centaje de viabilidad celular, tasa de expansión celular y tasa de
duplicación celular, en el mismo tiempo de cultivo, suprimiendo
la utilización de células de origen murino.
CONCLUSIÓN:
Los fibroblastos dérmicos humanos irradiados se presen-
tan como capa alimentadora alternativa a los fibroblastos 3T3
murinos para promover la expansión celular de queratinocitos.
Los fibroblastos dérmicos humanos irradiados proporcionan una
capa alimentadora funcional que permite la expansión in vitro de
manera eficaz de los queratinocitos que se van a utilizar con fines
clínicos para el desarrollo de un modelo de piel artificial humana.
AGRADECIMIENTOS
Servicio de Medicina Nuclear del Complejo Hospitalario
Universitario de Granada
FINANCIACIÓN
FIS ISC-III and FEDER PI13/02576 y Beca Mutual Médica
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